科研 科研日常 线粒体 免疫荧光 最近有很多同学向猫老师请教为什么固定后线粒体染料效果不好了，表现在背景高或者没有明显的线粒体形态。猫老师根据自己的实验经验等有如下理解： 一般来说可以用于固定的线粒体染料都是先在活细胞染色然后用于固定，染色大致以染色线粒体内膜为主，可用于固定的线粒体染料一般不依赖于线粒体膜电位。染色后一个重要问题是线粒体染料如何稳定驻留于线粒体内膜或基质，这个主要取决于固定条件和通透强度对于线粒体结构的维持以及染料是否会和固定剂等反应。 我们特地做了一个比较温和的免疫荧光条件，因为通透会在线粒体外膜打孔以便抗体进入，我们可以看到通透可以让线粒体外膜明显打孔，在线粒体基质依然保持连续结构的情况下，外膜已经有不同程度的受损，结构呈现出不完全连续。这个过程就有可能影响线粒体染料染色效果，从而出现线粒体染料溢露呈现高背景以及染料难以维持线粒体形态。